1 概述
無(wú)菌藥品是指法定藥品標(biāo)準(zhǔn)中列有無(wú)菌檢查項(xiàng)目的制劑和原料藥，包括注射劑、眼用制劑、無(wú)菌軟膏劑和無(wú)菌混懸劑等。在藥品生產(chǎn)過(guò)程中，環(huán)境是影響藥品質(zhì)量的重要因素，生產(chǎn)環(huán)境和人員行為直接決定了藥品的質(zhì)量，尤其是無(wú)菌藥品生產(chǎn)過(guò)程。
2 實(shí)施動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的意義和作用
在A/B 級(jí)潔凈區(qū)中，實(shí)施動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)是為人員行為評(píng)價(jià)、最終產(chǎn)品放行提供必要的依據(jù)，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)其中存在的問(wèn)題，并及時(shí)采取有效的措施解決問(wèn)題，以防不良影響進(jìn)一步擴(kuò)大，
同時(shí)，也為空氣平衡、人員行為和房間消毒方法的進(jìn)一步改進(jìn)提供了依據(jù)。另外，以此來(lái)判定潔凈室是否達(dá)到了規(guī)定的潔凈度，持續(xù)、穩(wěn)定地為生產(chǎn)提供保障，是評(píng)估生產(chǎn)環(huán)境控制的有效工具，是無(wú)菌藥品放行的首要條件。
3 動(dòng)態(tài)監(jiān)控項(xiàng)目和標(biāo)準(zhǔn)
3.1 監(jiān)測(cè)的項(xiàng)目
在生產(chǎn)操作前，要檢查、控制好區(qū)域內(nèi)的溫度、濕度和壓差；在生產(chǎn)過(guò)程中，要監(jiān)測(cè)沉降菌、浮游菌、懸浮粒子和風(fēng)速等情況；在關(guān)鍵操作完成后，要監(jiān)測(cè)設(shè)施、設(shè)備的表面和人員衛(wèi)生狀況。同時(shí)，在生產(chǎn)開(kāi)始前后，都要檢測(cè)隔離操作手套。
3.2 溫度、濕度監(jiān)測(cè)
在2010 版GMP 中并無(wú)具體的要求，但是，筆者認(rèn)為，這不是相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的降低，而是相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的提高，需要每個(gè)企業(yè)從產(chǎn)品工藝、設(shè)備儀器、人員操作的舒適性、微生物生存環(huán)境等方面有效控制溫度和濕度。例如，中溫型微生物在25～30 ℃生長(zhǎng)最適宜；濕生型微生物在濕度為70%～90%的環(huán)境下生長(zhǎng)、繁殖比較旺盛，因此，一般需要避開(kāi)此溫度、濕度范圍。同時(shí)，溫度、濕度過(guò)高或過(guò)低，對(duì)人體的舒適度、人員的工作情緒等都有很大的影響，進(jìn)而還會(huì)嚴(yán)重影響A/B 級(jí)區(qū)人員的操作行為，無(wú)法有效保證產(chǎn)品的安全性。一般情況下，無(wú)菌制劑生存環(huán)境的溫度應(yīng)控制在18～24 ℃、濕度應(yīng)控制在45%～65%.
3.3 相對(duì)壓差監(jiān)測(cè)
2010 版GMP 規(guī)定，不同潔凈度等級(jí)的潔凈區(qū)之間和潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間的空氣靜壓差應(yīng)大于10 Pa，應(yīng)裝有指示壓差的裝置；容易產(chǎn)生粉塵的生產(chǎn)區(qū)域應(yīng)與相鄰的室（區(qū)）保持相對(duì)負(fù)壓；相同潔凈度級(jí)別的不同功能區(qū)（操作間）之間，應(yīng)保持適當(dāng)?shù)膲翰钐荻�。目前，常用的壓差表量程�?～60 Pa之間，負(fù)壓的壓差表量程一般選擇在－30～30 Pa 之間，所以，在日常生產(chǎn)過(guò)程中，應(yīng)對(duì)儀器、儀表本身的校驗(yàn)或校正情況加強(qiáng)監(jiān)督和管理，因?yàn)閴翰羁梢栽黾赢惓��?bào)警的情況。但是，為了避免正常操作（比如開(kāi)門）造成的報(bào)警，可以適當(dāng)增加報(bào)警延時(shí)裝置，具體的延時(shí)時(shí)間可以根據(jù)不同人員的開(kāi)門、進(jìn)入或物料轉(zhuǎn)運(yùn)、關(guān)門所需時(shí)間驗(yàn)證得出。
3.4 粒子和微生物監(jiān)測(cè)
潔凈區(qū)的設(shè)計(jì)必須符合相應(yīng)的潔凈度要求，達(dá)到“靜態(tài)”和“動(dòng)態(tài)”的標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)，該區(qū)還應(yīng)當(dāng)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)微生物（浮游菌、沉降菌、表面微生物）的情況。微生物主要包括病毒、立克次體、細(xì)菌、菌類和原生蟲(chóng)類等，但是，與潔凈室有關(guān)的主要是細(xì)菌和菌類。因?yàn)榧?xì)菌不能單獨(dú)生存，所以，它一般都附著在塵粒上，因此，可以通過(guò)空調(diào)的初效、中效、（亞）高效過(guò)濾阻隔塵埃粒子，同時(shí)，也能完成對(duì)細(xì)菌的阻隔。對(duì)無(wú)菌區(qū)來(lái)說(shuō)，微生物檢測(cè)更重要，但是，直接檢測(cè)的周期長(zhǎng)，所以，可以用粒子水平來(lái)間接衡量其具體的情況。也就是說(shuō)，這兩方面的檢測(cè)可以為無(wú)菌生產(chǎn)過(guò)程環(huán)境的破壞度和衛(wèi)生狀況作評(píng)估，為最終產(chǎn)品的放行提供數(shù)據(jù)支持。
4 動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的方法和注意點(diǎn)
4.1 懸浮粒子
目前，懸浮粒子的測(cè)定方法主要有顯微鏡法和自動(dòng)粒子計(jì)數(shù)法兩種，而用于潔凈區(qū)空氣懸浮粒子監(jiān)測(cè)的儀器多為光散射粒子計(jì)數(shù)器和激光粒子計(jì)數(shù)器。綜合實(shí)際情況，建議在A 級(jí)區(qū)內(nèi)采用連續(xù)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)空氣懸浮粒子。在線監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可以實(shí)時(shí)反饋監(jiān)測(cè)信息，以便監(jiān)控人員及時(shí)提出解決其中存在問(wèn)題的方法。比如，提醒操作人員減緩動(dòng)作幅度，為環(huán)境清潔、消毒、停機(jī)等待等生產(chǎn)過(guò)程控制提供依據(jù)。與此同時(shí)，還要為空調(diào)過(guò)濾器的日常檢查、維護(hù)建立一套完善的操作、檢測(cè)、更換程序。只有這樣做，才能有效地控制其中存在的風(fēng)險(xiǎn)。
4.2 浮游菌
經(jīng)常使用撞擊法中的狹縫式采樣器監(jiān)測(cè)浮游菌采樣器，通過(guò)多孔蓋抽取空氣，而氣流中的微生物則撞擊附著在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)皿中瓊脂培養(yǎng)基的表面。通常情況下，在測(cè)定浮游菌時(shí)，每個(gè)采樣點(diǎn)的取樣量不得少于1 m3，而在生產(chǎn)過(guò)程中，可以設(shè)定采樣器，利用采樣、等待、再采樣的間隙方式監(jiān)測(cè)生產(chǎn)全過(guò)程。另外，浮游菌采樣器還有篩孔撞擊式、表面真空取樣、離心式、過(guò)濾式和液體沖擊式等采樣方式。
4.3 沉降菌
沉降菌是用暴露法收集降落在培養(yǎng)皿中的活生物性粒子，并將其培養(yǎng)、繁殖后加以計(jì)數(shù)所得。沉降菌測(cè)定的培養(yǎng)皿應(yīng)布置在有代表性的地方和氣流擾動(dòng)最小的地方。具體的采樣方法和培養(yǎng)方法是，將培養(yǎng)皿放置在接近于操作高度的位置后，打開(kāi)外蓋并倒扣放置，使培養(yǎng)基表面暴露出來(lái)。在靜態(tài)監(jiān)測(cè)時(shí)，培養(yǎng)皿應(yīng)放置不少于30 min 后再將外蓋蓋上收集；在動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)時(shí)，暴露時(shí)間應(yīng)根據(jù)沉降碟本身和環(huán)境兩方面因素驗(yàn)證所得，單個(gè)沉降碟的暴露時(shí)間可以少于4 h，但是，不得超過(guò)4 h。在同一位置，可以使用多個(gè)沉降碟連續(xù)監(jiān)測(cè)并累積計(jì)數(shù)，然后收集，酵母菌和霉菌通常在20～25 ℃的條件下培養(yǎng)5～7 d后計(jì)數(shù)，而需氧菌通常在30～35 ℃的條件下培養(yǎng)48～72 h 后計(jì)數(shù)。
沉降碟以其價(jià)廉、輕便、對(duì)空氣環(huán)境破壞較小等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于潔凈區(qū)環(huán)境檢測(cè)中。但是，在使用沉降碟時(shí)，應(yīng)先確認(rèn)沉降碟的暴露時(shí)間（記下平皿打開(kāi)和結(jié)束的時(shí)間），以保證暴露后的培養(yǎng)基不會(huì)因失水等原因而影響微生物的正常生長(zhǎng)。目前，好多廠家的培養(yǎng)皿是本廠自配的，密封性沒(méi)有購(gòu)買的培養(yǎng)皿強(qiáng)，在生產(chǎn)過(guò)程中，轉(zhuǎn)運(yùn)會(huì)對(duì)培養(yǎng)皿本身造成污染，使所得的結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性。所以，建議在生產(chǎn)過(guò)程中，應(yīng)使用培養(yǎng)皿本身的空白對(duì)照或購(gòu)買密封性好的培養(yǎng)皿，以提高檢測(cè)結(jié)果的可信度。
4.4 物體表面微生物測(cè)試
物體表面微生物測(cè)試可以確定物體（包括工作服）表面微生物的污染程度。一般情況下，可以使用棉簽間接取樣后培養(yǎng)、直接接觸法取樣和表面沖洗法3 種方法，而利用直接接觸法時(shí)，所用的接觸碟要放置至室溫后使用。
4.4.1 棉簽擦拭表面取樣方法
棉簽擦拭表面取樣方法的取樣面積一般為25 cm2，人體表面擦拭至少應(yīng)包括雙手手指印、頭、口罩、肩部、前臂、手腕和腿等。棉簽間接取樣適用于不規(guī)則表面，取樣時(shí)，手握住拭子柄，以30°角與取樣表面接觸，采用S 型或Z 型緩慢并旋轉(zhuǎn)棉簽充分擦拭。如果拭子頭為藻酸鈣材料，則要用稀鹽酸溶液作為稀釋劑（比如質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的檸檬酸鈉溶液），這樣才能讓拭子頭完全溶解。
4.4.2 直接接觸法
直接接觸法是將接觸碟直接接觸需采樣的物體表面，接觸時(shí)間一般在10 s 左右，培養(yǎng)后便會(huì)長(zhǎng)出菌落。因?yàn)樵摲椒ㄈ菀撞僮鞫�且可以定量，所以，被廣泛使用。但是，這個(gè)測(cè)試只適用于平整光滑的表面，通常在灌封或灌裝后清場(chǎng)前取樣。取樣后，需用蘸有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75%的乙醇的紗布擦拭被取樣表面，以除去殘留。將取樣后并做好標(biāo)記的接觸碟置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱的參數(shù)一般設(shè)定在30～35 ℃，培養(yǎng)72 h 后計(jì)數(shù)。
4.4.3 表面沖洗法
表面沖洗法適用于監(jiān)測(cè)大面積區(qū)域內(nèi)表面的微生物含菌量，包括設(shè)備軌道、儲(chǔ)水罐等。用定量的無(wú)菌水沖洗表面，收集淋洗水，用膜過(guò)濾法計(jì)算微生物的數(shù)量。
4.5 風(fēng)速測(cè)試
檢測(cè)生產(chǎn)過(guò)程中A 級(jí)區(qū)的風(fēng)速，使生產(chǎn)環(huán)境的風(fēng)速符合指導(dǎo)值（0.36～0.54 m/s），同時(shí)，還可以判斷層流是否開(kāi)啟、是否正常運(yùn)行、是否被堵或泄漏，使生產(chǎn)環(huán)境達(dá)到要求。目前，由于安裝的隔離器密閉性良好，所以，經(jīng)過(guò)相應(yīng)的驗(yàn)證，也可以適當(dāng)?shù)亟档蛯恿黠L(fēng)速。部分文獻(xiàn)指出，A 級(jí)區(qū)可以選擇正壓無(wú)菌紊流的流型，不一定都要選擇層流流型。
4.6 隔離操作器手套的檢測(cè)
目前，檢測(cè)手套時(shí)一般采用完整性檢測(cè)，對(duì)其內(nèi)部施加一定的壓力，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，壓力降低值在可接受范圍內(nèi)即視為合格。另外，還可以在每個(gè)班次生產(chǎn)前后，增加手套目檢程序等。檢測(cè)周期要根據(jù)產(chǎn)品的特點(diǎn)、設(shè)備和班次安排等因素驗(yàn)證得出。
5 日常監(jiān)控取樣點(diǎn)和取樣頻次
最關(guān)鍵點(diǎn)的位置作為取樣點(diǎn)并不一定適用，所以，必須考慮環(huán)境監(jiān)測(cè)會(huì)不會(huì)加大產(chǎn)品污染風(fēng)險(xiǎn)的概率。比如懸浮粒子的取樣點(diǎn)，一般布置在距離地面0.8～1.5 m 的位置，盡量避免在回風(fēng)口附近取樣，而且測(cè)試人員應(yīng)站在取樣口的下風(fēng)側(cè)等。潔凈區(qū)監(jiān)測(cè)中的取樣點(diǎn)和取樣量可以比潔凈區(qū)級(jí)別確認(rèn)時(shí)的取樣點(diǎn)和取樣量少，通過(guò)驗(yàn)證確定取樣點(diǎn)，且其要通過(guò)風(fēng)險(xiǎn)分析研究和監(jiān)測(cè)結(jié)果分析（至少要有6 個(gè)月以上的運(yùn)行數(shù)據(jù)作為分析的基礎(chǔ)）。監(jiān)測(cè)頻次問(wèn)題也是一個(gè)值得深思的課題，監(jiān)測(cè)頻次不夠，就不能很好地反映其中存在的問(wèn)題——監(jiān)測(cè)頻次過(guò)多，不利于資源優(yōu)化。因此，監(jiān)測(cè)頻次的確定一般使用風(fēng)險(xiǎn)數(shù)值分布（RNR），即風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生的嚴(yán)重性（SEV）與風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生的可能性（OCC）的乘積。根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)數(shù)值的大小確定不同的監(jiān)測(cè)頻率，同時(shí)，也要建立切實(shí)可行的措施降低其中的風(fēng)險(xiǎn)。
6 一般超標(biāo)處理方法和報(bào)告打印
在日常監(jiān)測(cè)過(guò)程中，如果監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)出現(xiàn)偏差時(shí)，其數(shù)據(jù)就會(huì)高于設(shè)定的限度，所以，必須通過(guò)CAPA（預(yù)防和糾正措施）調(diào)查發(fā)生了什么，如何防止該問(wèn)題再次發(fā)生，而偏差及其后續(xù)措施都必須有相應(yīng)的記錄。所以，要從人、機(jī)、料、法、環(huán)、測(cè)六個(gè)方面分析問(wèn)題，運(yùn)用風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估工具排查風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，找出要因，制訂切實(shí)可行的措施來(lái)解決問(wèn)題，同時(shí)，還可以做必要的培訓(xùn)、考核和評(píng)估工作，以便從根本上解決問(wèn)題。在日常監(jiān)測(cè)過(guò)程中，每一批報(bào)告都要打印出，并附入相應(yīng)批的生產(chǎn)記錄中。生產(chǎn)時(shí)間一般可以分為準(zhǔn)備、自凈、生產(chǎn)和清場(chǎng)4 個(gè)階段，但是，筆者認(rèn)為，報(bào)告打印的時(shí)間要包括環(huán)境的自凈時(shí)間和生產(chǎn)時(shí)間，并要備注解釋監(jiān)測(cè)超常和超標(biāo)結(jié)果，從而保證產(chǎn)品生產(chǎn)情況的可追溯性。
7.結(jié)論
隨著藥品監(jiān)管力度的加大，市場(chǎng)要求的增強(qiáng)，藥品生產(chǎn)企業(yè)必需嚴(yán)控生產(chǎn)全過(guò)程，尤其是無(wú)菌藥品的生產(chǎn)全過(guò)程。自動(dòng)化技術(shù)的應(yīng)用，使藥品生產(chǎn)線無(wú)人化操作逐步成為可能；無(wú)菌隔離器的使用，讓關(guān)鍵工序無(wú)人操作成為了可能。但目前，國(guó)內(nèi)隔離操作器的使用還存在一些缺陷，比如，在線監(jiān)測(cè)培養(yǎng)皿放入和取出的過(guò)程，手套在線更換執(zhí)行困難，系統(tǒng)存在泄漏時(shí)，應(yīng)急處理措施缺失等。針對(duì)這些問(wèn)題，需要進(jìn)行更為系統(tǒng)的研究。同時(shí)，應(yīng)用動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可以實(shí)時(shí)提供數(shù)據(jù)、報(bào)警信息，方便及時(shí)控制生產(chǎn)過(guò)程，采取有效的手段解決生產(chǎn)過(guò)程中存在的問(wèn)題。另外，應(yīng)用在線監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，可以減少工作人員的外來(lái)干預(yù)，減少對(duì)生產(chǎn)環(huán)境造成的污染，保證產(chǎn)品的質(zhì)量，最終維護(hù)患者的生命安全。