1 前言
深圳億天凈化通過本文指導(dǎo)并描述了在需要生物污染控制的環(huán)境下空氣懸浮生物污染的分析與測(cè)量技術(shù)。為了探測(cè)存在和可能需要監(jiān)控的活粒子，附件涉及采集代表性采樣。
氣懸浮生物污染的評(píng)估遵循本標(biāo)準(zhǔn)和附件A 的基本原則，它們要求在采用潔凈技術(shù)時(shí)要建立評(píng)估和控制生物污染的正式系統(tǒng)。
對(duì)危險(xiǎn)區(qū)氣懸浮生物污染的評(píng)估原則和方法進(jìn)行了說明。
采樣裝置的鑒定技術(shù)
2 原則
當(dāng)危險(xiǎn)區(qū)為空態(tài)、靜態(tài)、適當(dāng)?shù)目梢允褂脩B(tài)和常規(guī)的正常使用時(shí)，危險(xiǎn)區(qū)內(nèi)空氣的細(xì)菌污染探測(cè)和監(jiān)控方法是按采樣計(jì)劃用適當(dāng)?shù)牟蓸友b置采集活粒子。通過對(duì)采集培養(yǎng)基的直接震動(dòng)或采用專用膜過濾器過濾（對(duì)以上膜進(jìn)行后續(xù)處理）采集粒子。
3 采樣裝置
空氣懸浮活粒子的采集和計(jì)數(shù)有各種方法和采樣裝置[17；24；28]；特殊方法、材料和裝置的選用取決于采樣的目的。氣溶膠采樣的效率會(huì)受到粒子動(dòng)量的影響，（質(zhì)量與速率的產(chǎn)物）；因此在選擇適當(dāng)?shù)姆椒ê驮O(shè)備[17；18；21-28]時(shí)需格外注意。
采樣裝置分為兩類：
1） 無源采樣裝置，如沉淀盤，（涂敷玻璃或金屬盤或滑動(dòng)片和布；
2） 有源采樣裝置，如震動(dòng)和液體捕集采樣器和過濾采樣器。
以上裝置的生產(chǎn)廠家須提供使用說明書和使用限制。
3.1 選擇采樣裝置
采樣率，采樣時(shí)長和選定的采樣裝置可能會(huì)對(duì)采集的微生物的存活性產(chǎn)生很大的影響。沖擊裝置可能不適合對(duì)空氣懸浮活粒子的采樣，因?yàn)槿萘啃�，采樣率低并且容易打碎活粒子團(tuán)[21]。
由于投入商業(yè)使用的細(xì)菌空氣采樣系統(tǒng)數(shù)量大、種類多，所有系統(tǒng)又都有各自不同的物理和生物效率[19；32]，因此在選擇特定的用途時(shí)應(yīng)至少考慮以下因素：
a） 需采樣的活粒子的類型（細(xì)菌和/或真菌的孢子和/或營養(yǎng)細(xì)胞）[32]
b） 活粒子對(duì)采樣程序的敏感度
c） 期望的活粒子濃度
d） 探測(cè)生物污染量多少的能力
e） 用于所期望微生物的適當(dāng)培養(yǎng)基
f） 采樣時(shí)間與耗時(shí)
g） 采樣環(huán)境的周圍環(huán)境條件
h） 采樣器對(duì)單向氣流的干擾
i） 采樣器的特性，如：
1） 對(duì)于低含量空氣懸浮活粒子的適當(dāng)采吸流量
2） 適當(dāng)?shù)恼饎?dòng)/氣流速度
3） 采樣精度與效率
4） 易于搬運(yùn)（重量，體積）和操作（使用方便，輔助設(shè)備，對(duì)真空泵的依賴，水、電等）
5） 易于清洗、消毒或滅菌
6） 對(duì)要測(cè)量的生物污染不會(huì)自然增加活粒子來自采樣器的排氣不應(yīng)污染潔凈室。
3.2 無源細(xì)菌采樣裝置（沉淀式采樣裝置）
無源細(xì)菌空氣采樣器（重力沉淀采樣器）如沉淀盤，不測(cè)量空氣中活粒子的總數(shù)，只測(cè)量活粒子污染表面的速度。因此沉淀盤可用于對(duì)產(chǎn)品的氣懸浮污染進(jìn)行數(shù)、質(zhì)量的評(píng)估。先按單位時(shí)間確定沉淀盤的計(jì)數(shù)，然后將產(chǎn)品暴露的面積和時(shí)間與沉淀盤的相聯(lián)系，即可算出產(chǎn)品可能受到的污染量[28-30]。
以上裝置沒有總氣懸浮粒子的數(shù)量監(jiān)控值，因?yàn)樗鼈儫o法探測(cè)不沉淀到培養(yǎng)基表面的微生物，而且活粒子群的沉淀速度會(huì)受到氣流及其擾動(dòng)的影響。沉淀盤只應(yīng)從數(shù)量、質(zhì)量方面評(píng)估[21]因重力沉淀于特定使用場內(nèi)的空氣懸浮粒子對(duì)產(chǎn)品/裝置/表面的可能污染情況[28；29；30]
3.3 有源細(xì)菌采樣器
為評(píng)估空氣的細(xì)菌質(zhì)量，需要在危險(xiǎn)區(qū)使用有源空氣采樣裝置。有幾種商用的有源裝置，每種都有自己的限制。為了測(cè)量特殊情況如通風(fēng)管和單向氣流中的空氣生物污染，應(yīng)在等動(dòng)力狀態(tài)下進(jìn)行采樣。如果采樣不是等動(dòng)力的，得到的就可能是無代表性的、數(shù)量偏大的大粒子。如果吸管與氣流方向形成角度，也會(huì)引起活粒子的失真分布。進(jìn)入測(cè)量裝置的抽氣速率應(yīng)與周圍空氣移動(dòng)的速率相同且與氣流方向一致。
大多數(shù)的采樣器都有固定的真空入口方向，可以是垂直的（面朝下），也可以是水平的。
有的采樣器有可移動(dòng)的入口。入口速率通常是固定的；但是，在不同裝置之間入口速率會(huì)有很大區(qū)別，這一點(diǎn)在選擇設(shè)備時(shí)應(yīng)加以考慮。
采樣時(shí)，采樣點(diǎn)的空氣移動(dòng)方向可采用煙玻管來記錄。
有的采樣器不適于等動(dòng)力采樣，選擇時(shí)應(yīng)考慮監(jiān)控要求。根據(jù)采樣原理，有兩種主要采樣方法和相應(yīng)的設(shè)備適用于生物污染正常的的危險(xiǎn)區(qū)（低含量），即震動(dòng)采樣器和過濾采樣器。
3.3.1 震動(dòng)和液體捕集采樣器
由于有多種震動(dòng)和液體捕集或沖擊采樣器可用于探測(cè)活粒子的高低濃度[19；30]，選用的裝
置應(yīng)有以下特點(diǎn)：
a）撞擊培養(yǎng)基的采樣空氣的震動(dòng)速度是以下兩種情況之間的折衷，1）速率高，足以采集到約1μｍ的活粒子，2），速率低，足以避免因機(jī)械損傷或打碎細(xì)菌或微小真菌團(tuán)引起的活粒子存活性的下降；
b）抽氣流量，它決定著采樣時(shí)間，是兩方面因素的折衷，即需要足夠的采樣量以探測(cè)含量很低的生物污染和避免大量采樣會(huì)使采集培養(yǎng)基的物理與生物特性發(fā)生重大改變；
c）在生物污染較重區(qū)，請(qǐng)適當(dāng)選用震動(dòng)方法和采樣量，以得到能夠解讀結(jié)果數(shù)據(jù)的單獨(dú)的菌群[20]。
采樣裝置至少要符合以下要求：
a）在適當(dāng)時(shí)間內(nèi)采集1ｍ3、而又不會(huì)使采樣培養(yǎng)基明顯干燥的足夠流量，如約100L/min；
b）對(duì)培養(yǎng)基的中等震動(dòng)程度，如<20m/s。
3.3.2 過濾采樣器
過濾采樣裝置廣泛用于氣溶膠采樣。通過適當(dāng)選擇送氣機(jī)、過濾器介質(zhì)和過濾器尺寸，在給定的采樣時(shí)間內(nèi)幾乎可做任意量的采樣。
由于采用脫水方法，過濾可能會(huì)降低某些種類微生物的存活性，因此，選擇適當(dāng)?shù)牟蓸悠髟O(shè)計(jì)十分重要。過濾器通過若干原理從大氣中或氣流中去除粒子。這些原理有直接攔截，慣性處理，擴(kuò)散沉積，靜電吸附和重力吸引。在給定情況下起決定作用的原理取決于流量、過濾器性質(zhì)和氣溶膠性質(zhì)。
對(duì)于過濾采樣裝置的設(shè)計(jì)和使用，請(qǐng)考慮以下重要因素：
a）沒有影響活粒子震動(dòng)過濾膜速度的靜電；
b）保證適用的限制或抽氣流量及震動(dòng)空氣速度與3．3．1 相同；
c）保證過濾膜架與真空源連接，帶有測(cè)量采吸率的裝置，不污染過濾器材料；
d）保證過濾膜架可在無菌狀態(tài)下放置于過濾器架上，并可在過濾掉所需量的空氣后以無菌的方式取下，可直接放到培養(yǎng)基上或者如果是膠質(zhì)過濾膜，則按以下要求實(shí)施辦法：
1）建議方法：將濾膜溶于培養(yǎng)皿內(nèi)2.5ml的無菌氯化鈉緩沖液中（0.9%v/v）。適當(dāng)搖動(dòng)培養(yǎng)皿后將其置于培養(yǎng)箱內(nèi)，以適當(dāng)溫度培養(yǎng)1 到20分鐘以促進(jìn)溶解。使用該溶液的一份等分試樣接種到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上以適當(dāng)溫度培養(yǎng)。
2）替代方法：將濾膜直接放到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上以適當(dāng)溫度培養(yǎng)。進(jìn)行生物氣溶膠[20]采樣時(shí)，請(qǐng)考慮環(huán)境條件和過濾器要求的限制，如：
a）溫度；
b）含水量；
c）人工制品配方；
d）過濾器尺寸；
e）過濾器機(jī)械特性；
f）從采樣點(diǎn)到實(shí)驗(yàn)室的輸送條件；
g）只針對(duì)活粒子的計(jì)數(shù)限制。
4 結(jié)果的表述
建議活粒子數(shù)的表達(dá)采用活單位（VU），推廣到1m3。
(本文來源/潔凈區(qū))